|
Phương pháp đếm ký sinh trùng sốt rét mới hỗ trợ soi kính hiển vi trong nghiên cứu kháng thuốc sốt rét
Các nhà nghiên cứu trong Mạng lưới Nghiên cứu kháng thuốc sốt rét toàn cầu (WWARN_Worldwide Antimalarial Resistance Networks) đã làm việc với các chuyên gia của phòng thí nghiệm Global Good-Intellectual Ventures và Đại học Công nghệ Queensland để sản xuất một công cụ mới, được thế kế hỗ trợ cho các nhà nghiên cứu thường sử dụng kính hiển vi trong nghiên cứu bệnh sốt rét và sốt rét kháng thuốc. Công cụ tính toán mang tên “Obare Method calculator” là một công cụ tính toán dựa trên chương trình Excel của Microsoft dùng để nhập liệu, so sánh và báo cáo kết quả thu được từ kính hiển vi. Công cụ này được thiết kế nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho sự tham gia của các nhà nghiên cứu thực hiện các thử nghiệm lâm sàng sử dụng cẩm nang các phương pháp kính hiển vi mới xuất bản trên trang website Chương trình Nghiên cứu đặc biệt các bệnh Nhiệt đới (WHO-TDR) vào tháng tư năm 2015. Cẩm nang “Kính hiển vị phát hiện, xác định và định lượng ký sinh trùng sốt rét trên lam kính nhuộm màu giọt dày và giọt mỏng tại các địa điểm nghiên cứu”, nâng cao tính chắc chắn trong phát hiện, nhận dạng và định lượng KSTSR. Công cụ tính toán Obare Method Calculator cho phép các nhà khóa học thực hiện đánh giá có hệ thống các kết quả của 2 lần đọc lam kính có phù hợp nhau hay yêu cầu lần đọc thứ ba, bằng việc tính toán mật độ KSTSR trung bình các lần đọc trên lam kính có KSTSR dương. Nó cũng tạo thuận tiện cho báo cáo các kết quả đồng nhất. Tiến sĩ Mehul Dhorda, Giám đốc Chương trình Đảm bảo chất lượng Ngoại kiểm của WWARN cho biết công cụ tính toán mới là miễn phí cho các nhà nghiên cứu sốt rét, cho phép họ đưa ra các kết quả có chất lượng cao một cách nhanh chóng và chắc chắn. Nó bổ sung cho cẩm nang sử dụng kính hiển vi sốt rét của TCYTTG và chúng là một nguồn vô giá để nâng cao chất lượng sử dụng kính hiển vi trong nghiên cứu lâm sàng liên quan đến sốt rét”. 
Để sử dụng công cụ Obare Method Calculator, người sử dụng phải nhập một tài khoản xác nhận riêng cho mỗi trang xử lý số liệu. Công cụ này cho phép người sử dụng lựa chọn: -Loại lam (dày hay mỏng) có mật độ KSTSR được sử dụng để đánh giá; -Số lượng KSTSR tổng số, hay tính riêng lẻ mỗi loài KST xác định trên mỗi lam; -Nhiều phương pháp tính toán KSTSR khác nhau. Công cụ tính toán sẽ cho kết quả đồng nhất nếu kết quả từng trang dữ liệu là phù hợp nhau, hay khuyến cáo soi thêm lần thứ 3 nếu công cụ phát hiện các kết quả là không phù hợp nhau theo tiêu chuẩn như sau: -Các loài ký sinh trùng; -Sự có mặt/ vắng mặt của các dạng KSTSR thể vô tính; -Mật độ ký sinh trùng sốt rét. Tiến sĩ Michelle Gatton, giảng viên thâm niên tại khoa Y của Đại học Công nghệ Queensland cho biết thêm tính đúng và chính xác số lượng và loài KSTSR là tiêu chuẩn để đánh giá hiệu quả các thuốc điều trị sốt rét, các thiết bị chẩn đoán và các vaccin mới. Soi lam máu nhuộm màu là một chuẩn tham chiếu chính được sử dụng trong nghiên cứu lâm sàng và điều trị và rất cần thiết để chúng ta làm việc cùng nhau để đảm bảo tính chắn chắn và tin cậy của các kết quả tính toán. 
Công cụ Obare Method Calculator là một công cụ bổ sung rất được hoan nghênh đưa vào bộ công cụ của chúng ta phục vụ cho nghiên cứu sốt rét” Công cụ dựa trên ý tưởng của Peter Obare tại Viện Nghiên cứu Y khoa Kenya (KEMRI). Tiến sĩ Bernhards Ogutu, Nghiên cứu viên trưởng tại KEMRI nói: “Peter là một nhà nghiên cứu sốt rét tự lập, tận tâm và chân thành, có sự say mê lớn trong các cải tiến nâng cao chất lượng sử dụng kính hiển vị trong nghiên cứu sốt rét. Ông ấy đã có công trong việc xây dựng Trung tâm Chẩn đoán Sốt rét ưu việt của Dự án KEMRI-Walter Reed, Kisumu, Kenya. Công cụ tính toán này chỉ là một cống hiến khiêm tốn của Peter Obare trong việc ghi nhận đóng góp của ông đối với sự phát triển phương pháp kiểm soát chất lượng soi kính hiển vi trong nghiên cứu bệnh sốt rét nói riêng cũng như đối với sự cải thiện chất lượng chẩn đoán sốt rét nói chung. Đảm bảo chất lượng ngoại kiểm Đội ngũ đảm bảo chất lượng ngoại kiểm chuẩn của WWARN hợp tác với hơn 60 phòng thí nghiệm từ 27 quốc gia khác nhau để cải thiện việc phân tích các phác đồ điều trị thuốc sốt rét và nâng cao chất lượng dữ liệu đầu ra của nghiên cứu. Đội ngũ sẽ có nhiệm vụ: -Cung cấp cho các phòng thí nghiệm các tiêu chuẩn tham chiếu của thuốc đã được chứng nhận; -Cung cấp dịch vụ xét nghiệm thành thạo để giúp các phòng thí nghiệm tham gia chương trình cải thiện chất lượng kết quả của họ; -Cung cấp các quy trình có sẵn một cách miễn phí như hướng dẫn từng bước về chiết tách DNA. Cải thiện chất lượng dữ liệu đầu ra -Chương trình nguyên liệu chuẩn, cung cấp cho các phòng thí nghiệm các nguyên liệu tiêu chuẩn của thuốc sốt rét đã được thẩm định để giảm thiểu sai lệch gây ra từ tiêu chuẩn chất lượng nguyên liệu thấp và cải thiện tính chính xác của các dữ liệu giữa các phòng thí nghiệm; -Xét nghiệm thành thạo: trợ giúp khoa dược lý, thử nghiệm trong phòng thí nghiệm và các phòng thí nghiệm sinh học phân tử để đánh giá khả năng của họ về thực hiện phân tích thuốc, giải quyết bất kỳ vấn đề có thể phát sinh nào và cải thiện kết quả của họ. Với cách làm như thế, các phòng thí nghiệm cải thiện liên tục chất lượng dữ liệu phòng chống sốt rét được xuất bản và chia sẽ. 
Bản đồ các phòng thí nghiệm liên kết với đội EQA Để có nhiều thông tin hơn hay tham gia mạng lưới, tham khảo sách hướng dẫn của chúng tôi và tạp chí Malaria Journal, hay liên hệ với Chris Lourens, Giám đốc đơn vị Đảm bảo chất lượng QA/QC Dược lý bằng cách gởi email đến địa chỉ QAQC@wwarn.org | PK/PD | In Vitro | Phân tử | Chất lượng điều trị sốt rét | Kiểm tra độ thành thạo Kiểm tra kết quả phòng thí nghiệm dựa vào các tiêu chuẩn toàn cầu | Có | Nghiên cứu thí điểm | Có | Không | Nguyên liệu chuẩn Nguyên liệu thuốc sốt rét chuẩn được cân trước | Có | Có | Không | Có |
Công cụ tính toán Obare Method Calculator Soi kính hiển vi chất lượng cao các lam máu nhuộm màu vẫn là một tiêu chuẩn chính để phát hiện, xác định và định lượng KSTSR trong nghiên cứu. Công cụ tính toán Obare Method Calculator là phương tiện hỗ trợ các nhà nghiên cứu sử dụng kính hiển vị trong nghiên cứu sốt rét bằng tính toán mật độ KSTSR trung bình và đánh giá hai mẫu máu có phù hợp hay không. Nó là một công cụ dựa trên nền Microsoft Excel đã được phát triển nhằm tạo sự thuận lợi trong việc tham gia thực hiện các khuyến cáo về kiếm soát chất lượng nội bộ (IQC) được nói rõ trong cẩm nang các phương pháp xuất bản gần đây “Kính hiển vi phát hiện, xác định và định lượng các ký sinh trùng sốt rét trên lam máu nhuộm màu giọt dày và giọt mỏng tại các điểm nghiên cứu” (WHO, 2015). 
Công cụ này làm việc như thế nào -Người sử dụng phải nhập một tài khoản (ID) riêng cho mỗi trang dữ liệu nhập vào để đánh giá; -Công cụ này cho phép người sử dụng lựa chọn: oLoại lam (dày hoặc mỏng) đánh giá mật độ ký sinh trùng oSố lượng KSTSR như tổng số, số lượng riêng của mỗi loài ký sinh trùng được xác định trên lam (tất cả loài KSTSR phát hiện phải được khai báo, ngay cả trường hợp muộn); oNhiều phương pháp tính KSTSR: §Lam giọt dày: Số ký sinh trùng trên microlitre, tổng số bạch cầu đếm được và tổng số KSTSR (cùng với số vi trường soi bằng mắt và sự phóng đại của thấu kính trên KHV); §Lam giọt mỏng: số lượng KST trên microlitre, tổng số hồng cầu và tổng số KST. -Dự liệu nhập vào được ghi vào một trang excel riêng trong một file Excel. Miễn trừ và Không chịu trách nhiệm Mặc dù những lo lắng có cơ sở đã được xem xét giải quyết trong quá trình phát triển công cụ tính toán này, chúng tôi vẫn khuyến cáo rằng người sử dụng nên kiểm tra công cụ này để đảm bảo nó thực hiện tính toán như họ mong muốn. Nếu người sử dụng thấy bất kỳ lỗi nào hoặc sự sai khác nào, hãy liên hệ Mehul Dhorda – tại địa chỉ Email mehul.dhorda@wwarn.org. Người phát triển công cụ này không chịu trách nhiệm về việc mất dữ liệu, báo cáo sai, hay lỗi xuất hiện như là một kết quả từ bất kỳ sự tin tưởng vào công cụ này. 
Tỷ lệ làm sạch KSTSR (Parasite clearance rate) là tỷ lệ mức độ giảm KSTSR trong máu bệnh nhân sau điều trị, có thể sử dụng để đánh giá đáp ứng của cơ thể với điều trị thuốc artemisinin và dẫn suất, đánh giá thuốc mới và đáp ứng của liệu pháp điều trị trên những bệnh nhân sốt rét nặng. Chỉ số ước đoán làm sạch KSTSR (Parasite Clearance Estimator_PCE) của WWARN là một phương pháp thống nhất đẻ mô tả tỷ lệ làm sạch KSTSR. Đây là một công cụ nghiên cứu quan trọng khi đánh giá dữ liệu hiệu lực thuốc sốt rét và các thay đổi chỉ số sớm và muộn. Chỉ số PCE áp dụng như thế nào? Cung cấp một phương pháp chính xác, đáng tin cậy vàthích hợp về làm sạch KSTSR dựa trên đường tỷ lệ tuyến tính của slope log-parasitaemia với mối liên hệ về thời gian: -Sử dụng một phương pháp tiếp cận chuẩn để hỗ trợ giám sát thường quy hiệu lực thuốc ACTs efficacy và so sánh theo thời gian và không gian; -Cung cấp các thông tin có theerp hát hiện các thay đổi sớm về độ nhạy P. falciparum với thuốc artemisinin và hỗ trợ trong việc đáp ứng theo thời gian và hướng dẫn điều trị khi cần thiết; Các nhà nghiên cứu khuyến cáo rằng việc đánh giá sử dụng công cụ PCE cũng nên kết hợp chặt chẽ với việc đảm bảo đề cương chất lượng thường quy về mặt QA/QC kính hiển vi (microscopy quality assurance or quality control protocols) để xác định rằng kết quả thu nhận được là đáng tin cậy. 
Đo lường mật độ KSTSR với PCE Nhu cầu tối thiểu của thời gian từ khi lấy mẫu, đến khi đếm maamtj độ KSTSR là: 0 (0-2), 6 (4-8), 12 (10-14), 24 (22-26), 36 (34-36) và 48 (46-50) giờ và rồi đếm mật độ KSTSR ít nhất mỗi 24 giờ cho đến khi sạch hoàn toàn KSTSR. Các dữ liệu nên cung cấp trong file hồ sơ. Lợi điểm của chia sẻ dữ liệu PCE Khoảng 95% số datasets được phân tích PCE đã được chia sẻ đến WWARN, tại sao chúng ta lại không chứ? Việc chia sẻ dữ liệu với WWARN cho phép đánh giá tốt hơn về dữ liệu của bạn trong so sánh tất cả các dữ liệu. Bạn có thể góp phần dữ liệu của mình vào Dự án WWARN.
|
TRANG CHỦ
